凱氏定氮法首先將含氮有機物與濃硫酸共熱，經(jīng)一 系列的分解、碳化和氧化還原反應等復雜過程，最后有機氮轉變?yōu)闊o機氮硫酸銨，這一過程稱為有機物的消化。為了加速和*有機物質的分解，縮短消化時間，在 消化時通常加入硫酸鉀、硫酸銅、過氧化氫等試劑，加入硫酸鉀可以提高消化液的沸點而加快有機物分解，除硫酸鉀外，也可以加入硫酸鈉等鹽類 類提高沸點，但效果不如硫酸鉀。硫酸銅起催化劑的作用。凱氏定氮法中可用的催化劑種類很多，除硫酸銅外，還有汞、硒粉、鉬酸鈉等，但考慮到效果、 價格及環(huán)境污染等多種因素，應用非常廣泛的是硫酸銅。使用時常加入少量過氧化氫等作為氧化劑以加速有機物氧化。消化完成后，將消化液轉入凱氏定氮 儀反應室，加入過量的濃氫氧化鈉，將NH4+轉變成NH3，通過蒸餾把NH3驅入過量的硼酸溶液接受瓶內，硼酸接受氨后，形成四硼酸銨，然后用標準鹽酸滴 定，直到硼酸溶液恢復原來的氫離子濃度。滴定消耗的標準鹽酸摩爾數(shù)即為NH3的摩爾數(shù)，通過計算即可得出總氮量。在滴定過程中，滴定終點采用甲基紅-次甲 基藍混合指示劑顏色變化來判定。測定出的含氮量是樣品的總氮量，其中包括有機氮和無機氮。
以蛋白質為例，反應式如下：
消化：蛋白質 + H2SO4→(NH4)2SO4
+ SO2↑+ CO2 ↑+ H2O
蒸餾：(NH4)2SO4 + 2NaOH→ Na2SO4
+ 2 H2O + 2NH3 ↑
2NH3 + 4H3BO3→(NH4)2B4O7
+ 5H2O
滴定：(NH4)2B4O7
+ 2HCl + 5H2O→2NH4Cl + 4 H3BO3
蛋白質是一類復雜的含氮化合物，每種蛋白質都有其恒定的含氮量[約在14%~18%，平均為16%(質量分數(shù))]。凱氏定氮法測定出的含氮量，再乘以系數(shù)6.25，即為蛋白質含量。
本法適用于測定0.2～1.0mg氮的樣品測定。
通過本實驗使學生能理解凱氏定氮法的原理，掌握凱氏定氮法的操作方法。
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